El análisis de mutaciones por electroforesis capilar proporciona ventajas significativas respecto de los geles convencionales, puesto que permite distinguir entre modificaciones NHEJ (del inglés Non Homologous End Joining) y HDR (del inglés Homology Directed Repair) ocurridas en los genes estudiados. El uso de geles no denaturantes de gran resolución y un agente intercalante altamente sensible, permite que el equipo de electroforesis capilar Fragment Analyzer de AATI genere resultados altamente confiables. Sumado a esto, el usuario agrega a su línea productiva un flujo de trabajo automatizado, reduciendo el tiempo de manipulación de los operarios y gracias a los sistemas de capilares multicanal genera resultados para 12, 48 o 96 muestras a la vez en corridas de corta duración.
El software de análisis PROSize® de acceso libre y amigable, acelera y facilita la detección de mutaciones, por ejemplo para eventos de edición génica, el polímero específico “CRISPR Discovery Gel” permite diferenciar entre 1 a 6000 pb (DNF-910-1000CP) detectando la frecuencia de una mutación en un pool de células, así como determinando la presencia o ausencia de una mutación en una única célula comparando con la cepa nativa, e incluso bajo ciertas circunstancias permite asignar la zigocidad alélila.
Adicionalmente, debido a su indiscutible poder de resolución y sensibilidad los investigadores utilizan el Fragment Analyzer para detectar la calidad y cantidad del DNA genómico aislado previamente a la amplificación. Luego pueden establecer el tamaño de los amplicones post-PCR y determinar las cantidades equimolares de los pre-heteroduplex de la cepa nativa y el tamaño experimental de los amplicones obtenidos.
En resumen el analizador genético Fragment Analyzer puede ser utilizado de múltiples maneras asociadas a la mutagénesis CRISPR/Cas9 incluyendo sgRNA (del inglés single guide RNA) para sensar la eficiencia del corte, análisis de mutaciones en líneas celulares o pools de células individuales/ vegetales/microbios. Esto quiere decir que constituye un modo de monitoreo en el tiempo de los cambios sufridos por las líneas celulares entre pasaje y pasaje.
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